RETIMUR - Asociación Afectados de Retina de la Región de Murcia

Terapias génicas para corregir tres formas de enfermedades degenerativas de la retina.

Publicado el 17 de enero de 2014

 

Las terapias de genes desarrolladas en la Escuela de Medicina Veterinaria (Universidad de Pennsylvania) por los investigadores han trabajado para corregir las diferentes formas de ceguera. Aunque es eficaz, la desventaja de estos enfoques en el rescate de la visión es que cada enfermedad requiere su propia forma de terapia génica para corregir la mutación genética particular implicada, un proceso largo y complejo.

Con la esperanza de desarrollar un tratamiento que funcione de manera más amplia a través de las enfermedades, un equipo del Penn Vet (veterinaria de Pennsylvania) utiliza modelos de enfermedades caninas para examinar de cerca la forma en la que la actividad genética de la retina varía durante la progresión de tres formas diferentes de enfermedades degenerativas de la retina.

Sus resultados presentaron una similitud inesperada: Al principio de cada una de las enfermedades, los genes implicados en la misma vía específica de muerte celular parecen ser activados. Estos resultados apuntan a posibles intervenciones que podrían frenar la pérdida de la visión a través de una variedad de enfermedades de la retina hereditarias.

El trabajo, publicado en PLoS ONE , fue realizado por Sem Genini, un investigador senior de investigación; William A. Beltrán, profesor asistente de oftalmología, y Gustavo D. Aguirre, profesor de medicina genética y oftalmología, todos integrantes del Departamento de Estudios Clínicos del Penn Vet , Filadelfia.

El equipo examinó tres formas de enfermedades degenerativas de la retina, displasia de conos y bastones tipo 1, es el más grave, o de inicio más temprano, seguido de atrofia progresiva de retina ligada al cromosoma X y degeneración de la retina tipo 2. Todas estas enfermedades implican la muerte de las células fotorreceptoras y cada una es causada por una mutación genética distinta. Pero lo que los científicos no sabían es cómo las mutaciones activan una vía de señalización molecular que conduce a la muerte de las células fotorreceptoras.

"Lo que tenemos en mente es ser capaces de hacer frente a las múltiples formas de la enfermedad con un tratamiento", dijo Beltrán. "Queríamos tener una mejor comprensión de si hay alguna muerte celular o de supervivencia celular a través de vías comunes que podrían ser objeto de alguna de estas enfermedades."

Los investigadores analizaron la actividad de 112 genes en retinas enfermas y lo compararon con la actividad del gen en las retinas normales. Evaluaron la actividad genética en puntos de tiempo que se sabe que se corresponden con las fases principales de la enfermedad: la "fase de inducción", el momento antes de que el nivel de pico de la muerte de las células fotorreceptoras, la "fase de ejecución", cuando se producen las mayores tasas de muerte de células fotorreceptoras, y la "fase crónica", durante el cual la muerte de las células fotorreceptoras continúa en niveles algo reducidos.

Durante las fases de ejecución y crónica de la enfermedad, los investigadores identificaron un número de genes implicados en la muerte celular programada, o apoptosis, que tenían diferentes patrones de expresión entre los perros enfermos y normales.

De hecho, varias proteínas implicadas en el factor de necrosis tumoral, o vía TNF, aumentaron en la actividad durante la inducción y fases de ejecución. Esta vía está implicada en muchas enfermedades, en la diabetes, en el cáncer y la artritis reumatoide , entre otras.

"Esto es un nuevo resultado", dijo Genini. "No se espera que tengamos la vía de TNF controlada. Hemos asumido", dijo Aguirre, "que las enfermedades serían diferentes en uno y otro caso y que las células se suicidan por su propio camino específico y que tal vez bastante más tarde tendrían una vía final común. Pero lo que esto demuestra es que hay una gatillo temprano que es bastante similar entre las tres enfermedades ".

Una sorpresa adicional fue que las proteínas expresadas diferencialmente estaban presentes no sólo en las células fotorreceptoras, sino también en otras células en la retina, incluyendo células horizontales y de Müller.

"Nos centraremos en lo que pasaría con las células fotorreceptoras, las células que sabíamos estaban muriendo", dijo Beltrán. "Pero lo que nuestros resultados nos están diciendo es que, claro que se están muriendo, pero está sucediendo a través de las células con las que hablan."

Las compañías farmacéuticas ya han desarrollado inhibidores del FNT para tratar enfermedades como la artritis reumatoide . Genini, Beltrán y Aguirre dicen que sus resultados sugieren que estos medicamentos u otros similares pueden tener un papel que desempeñar en las enfermedades de la retina, y tal vez en otros que su equipo está estudiando.

"Por sí solo", dijo Beltrán, "un inhibidor de TNF puede que no sea una cura, pero que podría ser utilizado de manera complementaria a la terapia génica , ya sea reduciendo la marcha del curso de la degeneración antes de la corrección de genes que se suministra en la terapia o en combinación con las medidas correctoras de terapia génica ".

 

Fuente: Universidad de Pennsylvania.

Traducción: Rodrigo Lanzón.

Vocal de comunicación en Retimur.

Asociación de afectados de retina de la Región de Murcia.

 

Los avances en las tecnologías de terapia génica para el tratamiento de la retinitis pigmentosa

Hilda Petrs-Silvay Rafael Linden

La retinitis pigmentosa (RP) es un tipo de enfermedad que conduce a la degeneración progresiva de la retina. Enfoques experimentales para la terapia génica para el tratamiento de distrofias retinianas hereditarias han avanzado en los últimos años, ambos inclusive de la entrega segura de los genes de la retina humana. Esta revisión se centra en el desarrollo de la terapia génica para RP usando vectores virales adenoasociados recombinantes, que muestran un historial de seguridad positiva y hasta el momento han tenido éxito en varios ensayos clínicos para la enfermedad retiniana congénita. La terapia génica para RP se encuentra en desarrollo en una variedad de modelos animales, y los resultados a elevar las expectativas de futura aplicación clínica. Sin embargo, la traducción de este tipo de estrategias a la cabecera del paciente requiere una mayor comprensión de las mutaciones y los mecanismos que causan defectos visuales, así como el examen exhaustivo de los posibles efectos adversos.

 

Introducción

Las principales causas de la ceguera están asociados con un mal funcionamiento y / o degeneración de las células de la retina, lo que dificulta el flujo de la información visual desde el ojo hasta el cerebro. Similar a otras áreas del sistema nervioso central de los mamíferos, las neuronas de la retina no se reemplazan tras la degeneración. Sin embargo, los esfuerzos de todo el mundo tienen como objetivo desarrollar nuevas terapias para preservar o mejorar la función de la retina. Se espera que tales tratamientos para disminuir la progresión de la degeneración, y si es posible también para revertir su curso. Para ayudar a este esfuerzo, un número de modelos animales de degeneración de la retina han llevado recientemente a una mejor comprensión de los mecanismos de enfermedades de la retina, y en consecuencia han promovido el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas.

Enfermedades de la Retina muestran heterogeneidad genética y clínica notable.

La retinitis pigmentosa (RP) es el subtipo más común de degeneración de la retina, responsable de la pérdida de la visión en uno de cada 4.000 personas en todo el mundo.RP puede ser el resultado de defectos en cualquiera de los más de 60 genes que se heredan como autosómica dominante (30% -40% de los casos), autosómica recesiva (50% -60%), o X-linked (5 %% -15), y puede ocurrir ya sea solo o junto con otros trastornos sistémicos. No obstante, las mutaciones en 30% -35% de los pacientes con RP no pueden ser identificados.

A pesar del origen genético heterogéneo, pacientes con RP muestran características clínicas comunes, tales como, espícula ósea anormal, pigmentación, adelgazamiento de las capas, la retina degenerada; vasos atenuados de la retina; disfunción de los fotorreceptores o del epitelio pigmentario de la retina (RPE) , marcado por la disminución de electrorretinograma (ERG) las respuestas de ambos conos y bastones, y la muerte progresiva de los fotorreceptores. En la mayoría de los casos, las barras se ven afectadas primero, lo que lleva a la ceguera nocturna, pérdida del campo visual periférico que conduce a una visión de túnel, y la ceguera total. En unos pocos casos, los conos se afectan primero, causando la pérdida de la visión central. Todas las condiciones de RP son progresivos, pero la velocidad y el patrón de deterioro de la visión varía entre los pacientes. De hecho, la misma mutación del gen puede causar síntomas variables en función del entorno.

El conocimiento de los mecanismos subyacentes de la enfermedad es compatible con el diseño de terapias óptimas. Tal es el caso con la terapia génica, el objetivo de los cuales es ya sea para reducir la velocidad o detener el progreso de la degeneración de la retina en RP. Dado que la naturaleza de la mutación subyacente reduce la gama de opciones de tratamiento, la terapia génica para RP se discute a continuación de acuerdo a las clases genéticos de la enfermedad.

 

La terapia génica para las enfermedades oculares

Actualmente, la terapia génica representa la mejor esperanza terapéutica para muchas enfermedades retinianas hereditarias y adquiridas, y muchos ensayos preclínicos y clínicos se han realizado utilizando estrategias de terapia génica. Virus recombinante adenoasociado (VAAr) es el vector más ampliamente utilizado para la entrega de genes oculares, debido a su capacidad para transducir varios tipos de células de la retina in vivo de manera eficiente, resultado probablemente debido a su pequeño tamaño en relación con otros vectores virales. Otras ventajas de AAV son la falta de patogenicidad y la capacidad de transducir células que se dividen. Mientras que los vectores de AAV recombinantes no contienen secuencias de genes virales, una respuesta de anticuerpos neutralizante puede ir en contra de proteínas de la cápside, lo que puede afectar el uso de este vector en ciertos entornos.

El ojo es posiblemente más susceptible a la terapia génica que otros órganos, por varias razones: la estructura y la accesibilidad de la retina permiten la administración local, relativamente no invasiva del agente en comparación con el de otros órganos internos los resultados del tratamiento pueden ser fácilmente controlados, tanto objetiva como subjetivamente por métodos no invasiva, tales como el electrorretinograma y tomografía de coherencia óptica, además de la entrada del paciente, y el ojo cerrado y la presencia de la barrera sangre-retina pueden prevenir la propagación sistémica no intencional de vectores, y confieren un estado inmune privilegiado al ojo, lo que limita respuestas de rechazo hacia el transgén y las proteínas de vector.  A pesar de estas características, los vectores de rAAV están sujetas a una intensa investigación para mejorar su eficacia en la terapia génica.

Idealmente, la modulación terapéutica de genes debe ser restringido a tipos de células específicos. La penetración de los vectores de AAV puede ser limitado por el sitio de inyección para inyecciones intravítreas permiten llegar a la capa de células ganglionares, mientras que las inyecciones subretinales se dirigen a los fotorreceptores y RPE. Además, distintos serotipos de vectores varían tanto en su orientación y la eficacia de transducción.

Table 1

El tropismo serotipo también puede variar entre especies distintas. En modelos caninos, diversos serotipos se ha demostrado la transducción de la retina externa, pero el trabajo reciente tiende a favorecer especialmente los serotipos 5 y 8 para el ataque directo de los fotorreceptores.  En los primates no humanos, AAV2 muestra buena transducción en las células ganglionares de la fóvea de área, fotorreceptores de los bastones y el RPE ; AAV5 transduce principalmente en bastones,  mientras que los conos de primates pueden ser el blanco de AAV5 en combinación con promotores específicos de conos.

Un trabajo más reciente en primates mostraron transducción eficaz de fotorreceptores con los serotipos 1, 5, 8, y 9, con el último mostrando particularmente buena transducción de conos.  En varias especies, incluyendo primates, el serotipo 4 fue demostrado que el objetivo efectivamente es el RPE.

Mutaciones de tirosina en la cápside de AAV logran prevenir la ubiquitinación del vector y la consiguiente degradación.  nuevos vectores se han desarrollado en el que las cápsidas de diversos serotipos de AAV contienen sustituciones de fenilalanina para los residuos de tirosina. Estos proporcionan una mayor eficacia de la transducción, por lo tanto, la reducción de la cantidad de vector vírico requerido para efectos terapéuticos, y por consiguiente la disminución de la respuesta inmune al vector propio. Tales sustituciones resultan en un aumento de la penetración de la retina después de las inyecciones intravítreas, lo que permite la focalización de los fotorreceptores y RPE evitando al mismo tiempo el trauma de inyecciones subretinales que actualmente se utilizan para transducir estos tipos de células.

El desarrollo de vectores de AAV con promotores específicos de células ayuda en la selección de la célula de interés. Vectores rAAV que contienen promotores RPE65 humano fueron utilizados para inducir la expresión-RPE específica en perros deficientes en Briard-RPE65. Esto ha demostrado ser 10% más fuerte que el promotor de citomegalovirus ubicua, y fue ineficaz en animales de más edad.  Más recientemente, la guanosina trifosfatasa RP  (RPGR) la región del promotor se ha caracterizado, y puede ser útil en el futuro de focalización RPE.  Los fotorreceptores han sido abordados con éxito por tanto en rodopsina y en promotores de rodopsina quinasa, con una actividad sustancial en ratones, perros, y primates no humanos,  y un promotor arrestina cono se ha utilizado más recientemente para la distrofia de conos.  Promotores selectivos para las células bipolares de la retina y células ganglionares también se han explorado, sobre todo para las estrategias de intervención optogeneticas a través de la terapia génica, con el objetivo de examinar su uso para la recuperación de la función visual en pacientes en etapas avanzadas de la degeneración de la retina.

 

RP autosómica recesiva.

En la RP autosómica recesiva, el paciente tiene dos copias disfuncionales del gen mutado. En este caso, la terapia de sustitución genética constituye un enfoque directo para tratar tanto el genotipo y el fenotipo defectuoso. Un elemento clave de esta estrategia es que la terapia se dirige a las células de la retina donde la mutación o la falta del gen relevante hace que el defecto sea primario. Las células diana son generalmente fotorreceptores o el EPR.

Un ejemplo de terapia génica para la PR en modelos animales que imita el trastorno humano está dirigida a mutaciones en el gen MERTK. Receptor tirosina quinasa humano MER (MERTK) se clonó originalmente como una nueva tirosina quinasa, se expresa como una proteína con dos dominios de fibronectina de tipo III, dos dominios de tipo C2 similares a inmunoglobulina, y un dominio de tirosina-quinasa. Además de su capacidad potencial de transformación, la supresión del gen MERTK fue identificado como el defecto subyacente en un modelo de rata clásico por el Colegio Real de Cirujanos (RCS) las  mutaciones en MERTK son responsables de una forma autosómica recesiva rara de RP en humanos.

Los fotorreceptores están expuestos a niveles intensos de luz que conducen a la acumulación de proteínas y lípidos foto-oxidantes, así como los radicales libres, especialmente en las puntas de los segmentos exteriores. Por lo tanto, los fotorreceptores han evolucionado para someterse a constante pérdida externa del segmento en sus puntas a través de la fagocitosis del EPR, junto con la renovación de su base a través del cilio. Los  segmentos externos son digeridos en el EPR, desde donde las moléculas importantes se reciclan a los fotorreceptores. La falta de regulación de estas funciones adecuadamente puede conducir a la acumulación de escombros en el espacio interfotorreceptor y degeneración de la retina / EPR. MERTK situado en el EPR media la asociación entre estas células y los segmentos externos de los fotorreceptores, y en MERTK los ratones knock-out, así como en la rata RCS, MERTK no funcional falla para localizar a la membrana celular, la ingestión normal de células por el EPR de los segmentos externos de los fotorreceptores se deteriora. El inicio de las células apoptóticas por los fagocitos mononucleares también se altera en MERTK los ratones knock-out.  Estos datos son consistentes con la función de MERTK en la remodelación del citoesqueleto requerido para inmersión durante la fagocitosis.

Los intentos para tratar defectos MERTK hasta el momento se han centrado en la transferencia de genes. Se informó de que la transferencia de copias normales del gen MERTK  por vectores adenovirales en el espacio subretiniano de ratas RCS conduce a la mejora tanto histológica y funcional 30 días después de la inyección. Es importante destacar que esto incluía la corrección de defectos de fagocitosis RPE en las zonas cerca de la zona de inyección. Sin embargo, la supervivencia de los fotorreceptores parecía ser sólo transitoria.  Tal rescate fenotípico transitorio con vectores de adenovirus de primera generación se ha atribuido a la respuesta inmune generada contra los productos de genes virales.  En efecto, aunque el éxito de la terapia génica ocular se atribuye, en parte, por el estado de privilegio inmunitario relativo del ojo, se conoce una respuesta inmune celular significativa para ser promovida por las proteínas adenovirales, lo que limita la expresión del transgen mediada por adenovirus en la retina. A pesar de que la mayor parte del genoma adenoviral ha sido eliminado en las nuevas generaciones de vectores adenovirales, esta respuesta inmune celular todavía representa un riesgo a los ojos.  No obstante, estos experimentos de transferencia genética con vectores adenovirales validados tanto que el fenotipo de la enfermedad es causada por mutaciones en MERTK y que la condición no responde a la terapia de sustitución genética.

En un estudio posterior, se utilizó un vector AAV para transferir MERTK en el espacio subretiniano de ratas RCS, que conduce a la restauración de la función fagocítica, con una disminución de los desechos del segmento exterior. Análisis ERG indicaron que mejoraba transitoriamente la función visual y la morfología de la retina. La supervivencia de los fotorreceptores era, sin embargo, prolongada por sólo 12 semanas, incluso en la presencia de la continua expresión trans-gen MERTK.  Una posible explicación es que una vez que se activa la maquinaria de la degeneración, se puede retrasar, pero no revertir.  Según la norma mediada por picos AAV a aproximadamente 3-4 semanas después del tratamiento de expresión del transgen,  la acumulación de escombros del segmento exterior pueden desencadenar la degeneración de fotorreceptores antes de la actividad terapéutica máxima. Además, una sola inyección subretiniana no puede cubrir toda el área de la retina, la degeneración de los fotorreceptores y en partes distantes de la retina puede tener un impacto negativo en la supervivencia de los fotorreceptores en la zona tratada, lo que limita aún más los efectos del tratamiento.

A pesar del rescate incompleto en fotorreceptores en los primeros estudios que emplean vectores de VAAr, la terapia génica da resultados de apoyo como un enfoque terapéutico válido, siempre y cuando se utilicen vectores más rápido de inicio. De hecho, cuando se utilizó un vector lentiviral para transferir MERTK , mejoras funcionales duraron hasta 27 semanas y la supervivencia de las células fotorreceptoras se prolongó hasta por 30 semanas.

El intento más reciente para transferir MERTK mediante terapia génica se aprovechó de un vector de AAV que contiene Y733F-tirosina-fenilalanina. Este había sido mostrado para proporcionar una rápida y eficiente reporte de expresión del gen cuando se inyecta subretinalmente a los ojos de ratón adulto.  El vector de rAAV-MERTK llegó a mayor distancia en el rescate funcional y morfológicamente es más robusto que en los estudios anteriores.

 

RP autosómica dominante

Sólo una copia mutada del gen es suficiente para producir RP autosómica dominante. La enfermedad puede ser causada por la reducción en el nivel de proteína de tipo salvaje (haploinsuficiencia), por una ganancia de una función deletérea (efecto negativo dominante), o por una combinación de ambos. Las mutaciones dominantes también pueden conducir a la enfermedad al provocar la acumulación de proteínas tóxicas. Mientras una visión mecanicista limitada ha sido obtenida de los pacientes humanos, los estudios de expresión transgénicos y focalizadas en modelos animales han sido útiles para distinguir entre los diferentes tipos de mutaciones dominantes. Debido a la naturaleza dominante de esta clase de enfermedad, una simple terapia de sustitución genética es a menudo insuficiente para superar la expresión del alelo mutante, aunque la enfermedad por haploinsuficiencia puede responder a la terapia de sustitución genética. Más bien, la terapia génica dirigida a las enfermedades dominantes requiere o bien la supresión de la expresión del alelo mutado o un aumento en la expresión del alelo de tipo salvaje, o ambos. Porque a menudo hay muchas mutaciones dominantes que causan enfermedades en un solo gen, la eliminación dirigida de genes de reparación o para cada mutación independiente es problemática. Un enfoque alternativo sería la de promover la supervivencia celular, para conservar las células de la retina afectadas y retrasar el curso de la degeneración.

Las mutaciones más comunes asociadas con la RP autosómica dominante son, ya sea en el RHO o las RDS / periferina gen, que representan aproximadamente el 25% y el 10% de los casos, respectivamente. La terapia génica que se acerca a cada uno de esos tipos se presentan a continuación…

 

La rodopsina RP

La primera mutación descrita para la RP fue en el gen de la rodopsina - RHO . La rodopsina es el pigmento visual en las células fotorreceptoras de varilla, que consigue visión en condiciones de poca luz, y participa en el primer paso esencial de la fototransducción. Se compone por una parte de una proteína – la opsina - y por otro lado: el cromóforo 11 - cis -retinal. Opsina es una proteína que contiene el dominio transmembranal siete de la familia de los receptores G acoplados a la proteína, localizada predominantemente en las membranas de los disco de los segmentos externos de los bastones. La Isomerización del 11 - cis -retinal a todo- trans -retinal tras la absorción de un fotón induce cambios en la estructura de la opsina que promueve la activación de la proteína transducina G, iniciando así la cascada bioquímica conocida como la fototransducción.

La primera mutación de rodopsina  identificada codifica una sustitución-prolina-a histidina en la posición 23 (P23H).  P23H mutantes de rodopsina son retenidos en el retículo endoplásmico y son incapaces de asociarse con 11 - cis -retinal.  A diferencia del tipo salvaje de la rodopsina, P23H mutante es degradada por el sistema ubiquitina-proteasoma,  pero las grandes cantidades de proteínas mutantes acumulan como ubiquitinada P23H en el citoplasma.  Al igual que en otras enfermedades neurodegenerativas dominantes heredadas, como el Parkinson y la esclerosis lateral amiotrófica, la formación de agregados de proteínas intracelulares se asocian con la degeneración celular. Los ratones heterocigotos para RHO tienen morfología de la retina y la función normal, que muestra que la expresión de sólo un alelo funcional de rodopsina es suficiente para la visión. Sin embargo, en muchos casos de RP, la ganancia dominante de la función de la rodopsina mal plegada induce la degeneración de los fotorreceptores, y en tales casos, las mutaciones de un alelo sólo conducen a la discapacidad visual. Un enfoque plausible para el tratamiento de las mutaciones con ganancia de función es la de aumentar la degradación de la rodopsina proteosomal mal plegada, pero hasta la fecha no ha habido informes de un éxito significativo en los modelos animales. Un procedimiento alternativo podría ser a través de terapia dirigida al ácido ribonucleico (ARN) para silenciar el alelo mutante, mientras que se favorece el mantenimiento de la expresión del alelo de tipo salvaje. Terapias de silenciación de genes basado en la destrucción selectiva de un ARN específico mensajero (ARNm) se han logrado con éxito variable el uso de ribozimas, y más recientemente por la interferencia de ARN.

Las ribozimas son enzimas de ARN de auto-escisión de aproximadamente 30 nucleótidos, que se encuentran de forma natural en los eucariotas inferiores, los virus y algunas bacterias. Su estructura secundaria se compone de tres tallos:. El tallo central es el dominio catalítico responsable de la reacción de escisión, mientras que los dos dominios flanqueantes proporcionan los brazos antisentido necesarios para la unión del mRNA que conduce a la secuencia específica de escisión. Se demostró que in vivo la expresión de una ribozima de AAV-entregado, diseñado para reconocer y escindir la única transcripción producido por la P23H RHO transgén en ratas, redujo específicamente ARNm a partir del alelo mutante, se redujo la degeneración de los fotorreceptores, y condujo a la conservación funcional de la retina en el corto . plazo.  En estudios posteriores, se demostró que la expresión continuada de la ribozima redujo notablemente la tasa de degeneración de los fotorreceptores y la función de la retina conservado, según lo evaluado por ERG, durante al menos 8 meses en ratas transgénicas.  Estos resultados fueron la primera evidencia de que la silenciación del gen se acerca para la corrección de la enfermedad que puede ser eficaz para la terapia a largo plazo en la degeneración de la retina-autosómica dominante. Sin embargo, el diseño y pruebas de tales reactivos terapéuticos para los más de 120 mutaciones diferentes para la rodopsina, actualmente se sabe que no es económica o técnicamente viable. Por lo tanto, un experimento alternativo fue diseñado para atacar todos los ARNm de rodopsina, de tipo salvaje y mutante, a la vez, con un agente de silenciamiento que reconoce una secuencia diana común, mientras que simultáneamente entrega una copia de reemplazo de RHO , la secuencia de las cuales es resistente a la acción del agente de silenciamiento.

Más recientemente, los pequeños ARN de interferencia (siRNA) se ha convertido en más robusto y eficiente que las ribozimas para silenciar la expresión génica. 77 El mecanismo de silenciamiento se basa en procesos celulares ubicuos, que posiblemente podría conducir a un mayor éxito clínico y la aceptación del público. Interferencia de ARN (ARNi) inhibe la expresión génica mediante la degradación de mRNA en una secuencia de manera específica después de la introducción de ARN de doble cadena (ARNdc).Este largo dsRNA se corta en 21 -. A intermedios 23-mer activos, los siRNAs, que se incorporan y desenrolladas en el complejo de silenciamiento (RISC) inducida por ARN- 78 Cuando se carga con un ARNsi de hebra sencilla, RISC se une a la secuencia complementaria en el ARNm y escinde el último entre los nucleótidos 10 y 11 de la ARNsi, 79 iniciando así su degradación y la inhibición de la expresión de genes más.

A su vez, la expresión funcional de la proteína codificada por genes RHO de resistencia a ARNsi se ha demostrado a través de la transgénesis, así como por la expresión in vivo del gen de sustitución suministrado por rAAV en la presencia de las moléculas de ARNi dirigidos.  

Evidencia de beneficio terapéuticos de siRNA de supresión y sustitución en terapias AAV-entregado se obtuvo en ratones transgénicos P23H.  Estos resultados fueron los primeros en demostrar in vivo que la combinación de la supresión y sustitución puede tratar de herencia dominante RHO RP ligada a pesar de la heterogeneidad mutacional asociada.

 

Patrón RDS distrofia

Periferina / RDS (degeneración retinal lenta) es una glicoproteína transmembrana que, junto con una proteína asociada en la membrana externa del segmento de la retina, se localiza en la región de borde de los discos exterior del segmento en bastones y conos. Ratones portadores de una mutación en este gen ( RDS ) constituyen una de los primeros y mejores  modelos estudiados de degeneración de la retina desde su fenotipo fue descrito en 1978.  Este mutante nulo de origen natural no puede formar segmentos externos de los fotorreceptores, mientras que los heterocigotos tienen un fenotipo de segmentos externos desorganizados y cortos,  lo que sugiere que el nivel de proteína de un alelo de tipo salvaje no es suficiente para mantener la estructura externa del segmento y la función de la retina. Aunque estos fenotipos implican una exigencia de RDS para la morfogénesis del disco exterior del segmento correcto y el mantenimiento de los segmentos externos de los fotorreceptores, su papel estructural  aún no se entiende completamente.

RDS en Humanos , clonado en 1991, codifica una proteína de 346 amino ácidos putativa con un 92% de homología con la proteína de ratón.  En el mismo año, se identificaron mutaciones en pacientes con RP autosómica dominante.  Hasta el momento, más de 90 mutaciones en humanos se han identificado, que dan lugar a un amplio espectro fenotípico de distrofias retinianas, relacionados no sólo con RP sino también con una variedad de distrofias maculares, en particular el patrón de la distrofia. Una característica común de estos trastornos es la pérdida de la mácula (retina central) de fotorreceptores, un fenotipo también se observa a lo largo de la RDS - / - retina del ratón. La heterogeneidad genotípica y fenotípica hacen que la extensión de los estudios en modelos animales para seres humanos sea incierto. Actualmente, sin embargo, la terapia génica parece ser el enfoque más prometedor para el tratamiento de la enfermedad de periferina / RDS. Tras la inyección subretiniana de un vector de AAV que contiene RDS , los ratones homocigotos nulos respondieron con aumentos en la síntesis de la rodopsina, la corrección de la formación de exterior-segmento de varilla, y la restauración de la función visual en las primeras 14 semanas después del tratamiento.  Sin embargo, el tratamiento no dar lugar a la conservación a largo plazo de los fotorreceptores,  lo que demuestra la importancia crítica de RDS en la integridad del segmento externo de los fotorreceptores, y sugiriendo que la supresión y sustitución de las estrategias de mutación independiente discutidos anteriormente para RHO-RP autosómica dominante pueden ser útiles aquí también .

De hecho, el concepto de una estrategia de terapia génica doble de la supresión mediada por ARNsi de RDS junto con la sustitución de genes a través de vectores de AAV que contienen ARNsi fue validado con la demostración de reducción de hasta el 50% de expresión de RDS junto con la expresión simultánea de un ARNsi-resistente transcripción de reemplazo en la retina de ratones in vivo.

 

RP ligada al cromosoma X

 RP ligada al cromosoma X (XLRP) es una de las formas más graves de RP, que se caracteriza por un inicio temprano y rápida progresión de la pérdida de la visión, que representan el 6% y el 20% de todos los casos de RP. Hasta el momento seis loci de defectos genéticos han sido mapeado en XLRP (RP2 [MIM 312600], RP3 [MIM 312610], RP6 [MIM 312612], RP23 [MIM 300424], RP24 [MIM 300155] y RP34 [MIM 300605]) , pero sólo se identificaron dos genes: RP2 y RPGR o RP3 .  Estudios en pez cebra proporcionan una idea de las funciones celulares de ambos RPGR/RP3 y RP2 ., debido al alto grado de conservaciones funcionales entre los genes humanos y sus homólogos

Las mutaciones en el RPGR/RP3 cuenta para el 70% de XLRP y la enfermedad se manifiesta en los pacientes de sexo masculino sin la transmisión de hombre a hombre del fenotipo. Sin embargo, las familias con herencia y mujeres portadores dominantes muestran síntomas de la enfermedad de grado variable. RPGR/RP3 producto es esencial para la viabilidad celular, y se localiza en los cilios de conexión y cuerpos basales de bastones y conos fotorreceptores, con un posible papel en el transporte de proteínas y microtúbulos de organización. Aproximadamente el 60% de todos los casos XLRP están asociados con mutación en fase de lectura abierta en ORF15 de RPGR/RP3 .

Un potencial de la terapia génica para RPGR/RP3 XLRP se ensayó en dos modelos caninos a través de la inyección subretiniana de rAAV serotipo 5 humano de codificación / RP3 bajo proteína humana de unión a retinoide-interfotorreceptor o G-receptor acoplado a proteína quinasa. En general, el tratamiento fue muy efectivo, con la preservación de los núcleos de los fotorreceptores y los segmentos de interior / exterior. Ambas funciones de la barra y los fotorreceptores conos estaban en niveles más altos en ojos tratados que en los ojos de control, lo que proporciona una prueba de principio para la traducción a la integridad personal.

A su vez, las mutaciones en el causante de la enfermedad RP2 cuenta aproximadamente el 15% de XLRP, y se distribuyen de manera más uniforme a lo largo del gen. Se cree que su producto para tener un papel en el tráfico de proteínas a la membrana plasmática y en el mantenimiento de la cohesión de Golgi. La mayoría de las mutaciones en RP2 se localizan en el cofactor C dominio homólogo, y se predijo para generar una proteína truncada con la localización interrumpida.  La terapia génica todavía no se ha dirigido a este gen.

 

Neuroprotección en RP

Entre el gran número de mutaciones asociadas con la enfermedad, la característica común de la enfermedad es la degeneración de conos y bastones fotorreceptores. Elementos de prueba de estrés del retículo endoplásmico, así como la ejecución de la muerte celular por apoptosis, se han identificado en la muerte de células de fotorreceptores. Por consiguiente, dos protocolos de terapia génica han sido diseñados para interferir con estos eventos, en un intento para preservar las células visuales. Incluso un retraso en la degeneración puede ser importante en una terapia de combinación, para permitir tanto que los fotorreceptores mantengan la función visual como la expresión de los transgenes de recambio aumenta.

La afectación de la respuesta de estrés del retículo endoplásmico se identificó entre los eventos patológicos de RP.  Recientemente se demostró que la sobreexpresión mediada por rAAV en fotorreceptores protegidos en la P23H RHO modelo transgénico de RP autosómica dominante, y podría ser útil para otros tipos de RP en el que la mutación está relacionada con la acumulación de proteínas mal plegadas.  Por otro lado, la resistencia a la apoptosis se logró con la entrega mediada por VAAr del gen XIAP en las células RPE humanas cultivadas,  y su sobreexpresión prolonga los efectos de AAV- PED6β terapia génica.  Además, se observó la preservación de los fotorreceptores en varios modelos de RP después de la entrega de rAAV de diversos factores neurotróficos, como el factor de células gliales derivados de la línea neurotrófics, factor neurotrófico ciliar, factor neurotrófico derivado del cerebro, y factor de crecimiento similar a la insulina, entre otros.

 

Perspectivas de futuro

La terapia génica con vectores AAV es ahora común en modelos de ratones de diferentes enfermedades de la retina humana. Algunas terapias se han abierto camino a los ensayos clínicos, pero sólo uno ha avanzado lo suficiente como para allanar el camino hacia el uso clínico, es decir, los actuales ensayos para amaurosis congénita de Leber 2. Incluso en este caso, los datos recientes desenredaron una disociación entre la recuperación funcional y la prevención de la muerte de células de fotorreceptores. Otros aspectos actualmente bajo investigación están relacionados con la respuesta inmune a los vectores de AAV recombinantes, especialmente sobre la readministración, así como la relación de la edad de inicio con ventana de oportunidad para la terapia génica dirigida a distintas formas de amaurosis congénita de Leber.

A medida que más estudios de antelación, esperamos una mayor expansión del campo en los próximos 5-10 años. Evidentemente, será necesario terapias génicas que puedan adaptarse a cada paciente, a fin de abordar de manera óptima el estado de la degeneración en el momento del tratamiento. Defectos de un único gen, si se trata a tiempo, se beneficiarán más de la sustitución directa de los genes terapéuticos o de corrección / ablación del gen infractor. Para muchos de estos trastornos, sin embargo, el número de pacientes son tan pequeños que terapias neuroprotectoras génicas más generales son propensos a ser desarrolladas primero, debido a que mantienen la promesa para prevenir o retrasar la degeneración en una amplia variedad de trastornos de la retina.

Para las distrofias de la retina de la última etapa, en la que la visión de los fotorreceptores mediada es esencialmente ausente, prótesis de retinas, terapias de reemplazo celular o modificaciones basadas en los genes de las células de la retina interna para convertirse en receptores de luz pueden ser las alternativas más probables.  Las células madre y progenitoras pueden ser aisladas a partir de un número de fuentes, incluyendo el tejido embrionario, cerebro adulto, y hasta la retina, lo que llevó a muchos investigadores a desarrollar el potencial para el uso de estas células para generar células de la retina para el trasplante.

Sin embargo, hay varios obstáculos que deben superarse ante estas técnicas puedan ser aplicadas, tales como el bajo rendimiento de la diferenciación de las células madre exógenas y la complejidad de las conexiones sinápticas necesarias entre las células de la retina trasplantadas y endógenas. Explotación de reemplazo celular requerirá una comprensión más profunda de la biología del desarrollo y la identificación de los principales reguladores de los distintos caminos de la diferenciación celular.

En conclusión, los avances en la comprensión de la genética y fisiopatología de la enfermedad de la retina ya han establecido los fundamentos de nuevas terapias basadas en genes para varios trastornos que no han respondido a los tratamientos convencionales, y los vectores AAV recombinantes son el centro de este avance hacia la cura de degeneraciones de la retina.

 

Agradecimientos

Investigación de los autores fue financiado por el CNPq y FAPERJ, y no hay conflictos de interés con respecto a esta publicación.

 

 

Fuente: ncbi.nlm.nih.gov

Traducción: Rodrigo Lanzón.

 

La ONCE y la Universidad de Alicante investigan contra la ceguera

La ONCE y la Universidad de Alicante investigan contra la ceguera El objetivo es encontrar nuevas terapias para el tratamiento de enfermedades degenerativas como la retinosis, el glaucoma y la Degeneración Macular Asociada a la Edada (DMAE).
 
En la actualidad no existe un tratamiento efectivo para la retinosis pigmentaria. Sin embargo, varias son las alternativas terapéuticas que se están investigando: la terapia génica, las células encapsuladas y el trasplante de células madre son alternativas con un futuro esperanzador en la curación .El término retinosis pigmentaria engloba un amplio número de enfermedades neurodegenerativas de la retina que afectan fundamentalmente a los fotorreceptores, lo que produce una pérdida de visión gradual que desemboca en ceguera.
 
Pero mientras se consigue esto, «sería interesante estudiar otros posibles tratamientos a más corto plazo que, al menos, puedan retrasar la evolución de la enfermedad», explica el dcotor Nicolás Cuenca Navarro , que lidera la investigación ‘Nuevas Terapias para enfermedades neurodegenerativas de la retina: Terapia Farmacológica con norgestrel y Génica con microARN’.
 
Para ello, según apunta el doctor Cuenca, se han utilizado como modelos experimentales de retinosis pigmentaria ratas P23H, un animal que tiene la misma mutación que existe en humanos y que produce ceguera progresiva.
 
«Se ha demostrado que los antiapoptóticos (preventivos de ciertos tipos de muerte celular) permiten obtener un retardo de dicha degeneración retiniana en algunos modelos animales de retinosis pigmentaria», señala el investigador.
 
Objetivos del proyecto
 
El proyecto, por el que colaborarán la ONCE y la Universidad de Alicante, pretende determinar el potencial terapéutico del antiapoptótico llamado norgestrel para retrasar o prevenir la muerte de los fotorreceptores y la degeneración retiniana.
 
También prevé establecer las diferencias de expresión de los microARNs en la degeneración de la rata P23H.
 
Otro de los objetivos es estudiar el efecto neuroprotector de los microARNs en cultivos celulares de fotorreceptores y en la rata P23H. La eficacia de estos tratamientos se evaluará mediante electrorretinogramas, con objeto de medir la actividad funcional de los distintos tipos celulares retinianos, y mediante métodos de inmunocitoquímica con objeto de caracterizar sus efectos sobre la morfología y conectividad sináptica de las neuronas retinianas.
 
De los resultados obtenidos se espera esclarecer los mecanismos básicos involucrados en la degeneración retiniana de la retinosis pigmentaria con vistas al desarrollo de nuevas terapias y su posible utilización en la clínica.

Nueva terapia génica mejora la visión en pacientes con coroideremia

Choroideremia gene therapy promosing results

Investigadores del Reino Unido han utilizado una terapia genética experimental para restaurar parte de la visión en los pacientes que están quedando progresivamente ciegos debido a una enfermedad ocular genética llamada "coroideremia."

Investigadores de la Universidad de Oxford han tratado a nueve pacientes que sufren de coroideremia con una nueva terapia que está diseñado para reemplazar un gen defectuoso por uno sano en una sola inyección.

Los resultados de los primeros seis pacientes se han publicado hoy jueves en la revista The Lancet Medical Journal.

 

La terapia génica de la retina en pacientes con coroideremia: resultados iniciales de una fase 1/2 de ensayos clínicos

The Lancet, Publicación online, 16 Enero 2014

Prof Robert E MacLaren FRCOphth a b c , Markus Groppe PhD a b c, Alun R Barnard PhD a, Charles L Cottriall PhD b, Tanya Tolmachova PhD d, Prof Len Seymour PhD e, K Reed Clark PhD f, Prof Matthew J During FACP g, Prof Frans P M Cremers PhD h,Prof Graeme C M Black FRCOphth i, Prof Andrew J Lotery FRCOphth j, Susan M Downes FRCOphth a b, Prof Andrew R WebsterFRCOphth c k, Prof Miguel C Seabra MD d l


ABSTRACTO
Choroideremia es una enfermedad recesiva ligada al cromosoma X que lleva a la ceguera debida a mutaciones en el gen CHM, que codifica la proteína Rab escort 1 (REP1). Se evaluaron los efectos de la terapia génica de la retina con un virus adeno-asociado (AAV) que codifica REP1 vectorial (AAV.REP1) en pacientes con esta enfermedad.

 

MÉTODOS
En un ensayo clínico multicéntrico, seis pacientes varones (edad 35-63 años) con coroideremia se administraron AAV.REP1 (0.6 -1 · 0 × 10 10 partículas del genoma, con inyección subfoveal). Pruebas de la función visual incluyen la agudeza visual mejor corregida, microperimetría, y las pruebas de sensibilidad de la retina para la comparación de los valores de referencia de 6 meses después de la cirugía. Este estudio se ha registrado en ClinicalTrials.gov , número NCT01461213 .

 

HALLAZGOS
A pesar de someterse a un desprendimiento de retina, que normalmente reduce la visión, dos pacientes con coroideremia avanzada que tenían bajo la línea de base de la agudeza visual mejor corregida ganaron 21 letras y 11 letras (más de dos y cuatro líneas de visión). Otros cuatro pacientes con agudeza visual mejor corregida casi normal al inicio del estudio se recuperaron hasta el plazo de una a tres letras. Ganancia media de la agudeza visual global fue de 3,8 letras (SE 4.1). Sensibilidad máxima medida con la microperimetría adaptada a la oscuridad aumentó en los ojos tratados de 23,0 dB (SE 1,1) al inicio del estudio a 25,3 dB (1,3) después del tratamiento (aumento de 2,3 dB [IC del 95% 0 · 8-3 · 8]). En todos los pacientes, durante los 6 meses, el aumento de la sensibilidad de la retina en los ojos tratados (media 1,7 [SE 1.0]) se correlacionó con la dosis de vector administrada por mm 2 de la retina restaurada (r = 0,82, p = 0,04). Por el contrario, se observaron pequeñas reducciones no significativas (p> 0,05) en los ojos de control, tanto en la máxima sensibilidad (-0 · 8 dB [1,5]) y la sensibilidad media (-1 · 6 dB [0.9 ]). Un paciente en el que el vector no se administró a la fijación excéntrica de la fóvea que incluye la isla ectópica del epitelio pigmentario de la retina que había estado expuestos a vectores también mejoró la supervivencia.

 

INTERPRETACIÓN
Los resultados iniciales de este ensayo de terapia genética de la retina son consistentes con la mejora de los bastones y la función de los conos que superaron los efectos negativos de un desprendimiento de retina. Estos hallazgos apoyan aún más la evaluación de la terapia génica en el tratamiento de coroideremia y otras enfermedades, tales como la degeneración macular relacionada con la edad, para los que la intervención idealmente se debe aplicar antes de la aparición del adelgazamiento de la retina.

 

FINANCIAMIENTO
Departamento de Salud y Wellcome Trust del Reino Unido.

 

 

(Continuación de la noticia traducida anteriormente)

Choroideremia gene therapy results

La Choroideremia es causada por defectos en el gen CHM que se encuentra en el cromosoma X, según declara el grupo de Oftalmología Clínica de Oxford en un comunicado.

El gen que falta hace que las células pigmentarias de la retina dejen de funcionar y finalmente mueren. A medida que la enfermedad progresa, la retina comienza a reducirse, lo que provoca pérdida de la visión.

No existe un tratamiento para la coroideremia - que afecta principalmente a los hombres - es decir los pacientes pierden progresivamente su visión hasta que se queda completamente ciego. Se estima que la enfermedad afecta a 1 de cada 50.000 personas.

En el estudio publicado, seis pacientes con diferentes niveles de visión fueron inyectadas con un virus genéticamente modificado que lleva una copia sana del gen faltante. El virus actúa como un vehículo de suministro, que lleva el gen que falta a la retina para sustituir el defectuoso.

Seis meses después del tratamiento, todos los pacientes tenían una visión que ha sido puesta a prueba.

Todos los pacientes tratados mostraron mejorías en su visión con poca luz, y un tercio de los pacientes fueron capaces de leer más líneas en una tabla optométrica, dijeron los investigadores.

Dr. Robert MacLaren, investigador principal del estudio, dijo que los hallazgos iniciales son revolucionarios y pueden ayudar a los investigadores a estudiar otras enfermedades oculares.

"Esto tiene enormes implicaciones para cualquier persona con una enfermedad de la retina genética como la degeneración macular relacionada con la edad o la retinitis pigmentosa, ya que por primera vez se ha demostrado que la terapia génica puede ser aplicada de manera segura antes de la aparición de la pérdida de visión", dijo en un comunicado.

Y si bien es demasiado pronto para decir si los beneficios de la terapia génica durarán indefinidamente, las mejoras de la visión en los seis pacientes hasta ahora se han mantenido durante dos años sin ningún tipo de efectos secundarios, dijo.

MacLaren, dijo que el grupo de investigación cree que tratamientos adicionales pueden ser más efectivos, y actualmente están probando dosis más altas en tres pacientes.

Jonathan Wyatt, de 65 años, fue el primer paciente en recibir la terapia génica. Dice que desde que tiene el tratamiento, la visión en su ojo izquierdo ha mejorado.

"Ahora cuando veo un partido de fútbol en la TV, si miro a la pantalla con mi ojo izquierdo solo, es como si alguien hubiera encendido los focos", dijo Wyatt en un comunicado. "El verde del campo de juego es brillante, y los números de las camisetas son mucho más claras."

Los resultados del estudio de Oxford están dando esperanza a los investigadores canadienses, que se preparan para iniciar sus propios ensayos de terapia génica.

Choroideremia gene therapy promising results

"No ha sido, hasta este punto, no había ningún otro tratamiento disponible para estos individuos", dice el profesor de oftalmología Dr. Ian MacDonald de la Universidad de Alberta  a CTV News. "Ahora tenemos algo que ofrecer, así que es muy emocionante."

MacDonald está conduciendo su propio ensayo de terapia génica, que tendrá su sede en Alberta y en ella participarán 12 pacientes.

Brantford, Ontario. El residente Robert Hillier, de 63 años, tiene coroideremia. Poco a poco ha ido perdiendo su vista en la última década y ahora es considerado legalmente ciego.

"La luz del sol es un problema, días claros son un problema y que la pequeña isla de la vista se hace más pequeño cada año", dijo a CTV News. "(Hay) días buenos, días malos ... algunos días parece terriblemente pequeño."

Él dijo que estaría dispuesto a viajar a cualquier lugar para obtener la terapia génica, que puede ser su única esperanza de recuperar un poco de su visión.

"Este tratamiento tiene el potencial de detener la enfermedad en sus ojos", dijo. "Esto me da esperanza, ya que proporciona la posibilidad de que podría no ser totalmente ciego en cinco años."

Informe de la CTV News Corresponsal Médico Avis Favaro y Elizabeth St. Phillip

 

Fuente: The Lanceta

Fuente ampliación de la noticia: Ctvnews

Traducción: Rodrigo Lanzón

 

Spark Therapeutics recluta 24 pacientes en la Fase 3 de su terapia génica para un tipo de ceguera causada por gen RPE65

 

SAN FRANCISCO, California . , 14 de enero de 2014

Spark  Therapeutics, una compañía de terapia génica, tiene alcanzado su meta de reclutamiento de pacientes para su programa clínico más avanzado, un estudio de fase 3 para distrofias retinianas hereditarias causadas por mutaciones en el gen RPE65 . lo dijo el CEO de Spark, Jeffrey D. Marrazzo , en la presentación de ésta y otras actualizaciones corporativas, hoy en la 32 ª Conferencia Anual de JP Morgan en San Francisco. Marrazzo dijo que Spark fue capaz de lograr su meta de reclutamiento un año después de la iniciación del estudio y anticipa la presentación de los datos a finales de 2015 . Actualmente , no hay tratamientos farmacológicos para esta o cualquier forma de distrofia retiniana hereditaria , que provoca en última instancia ceguera irreversible.

 " El hecho de que hemos sido capaces de inscribir a los pacientes en nuestro programa clínico tan rápidamente y sin problemas refleja la necesidad crítica asociada con distrofias hereditarias de retina , así como la amplia experiencia de nuestros fundadores y el duro trabajo de los equipos clínicos en el Hospital de Niños de Filadelfia y la Universidad de Iowa ", dijo Jeffrey D. Marrazzo , co -fundador , presidente y director ejecutivo. " Para hacer realidad nuestra visión de transformar la vida de los pacientes en una sola dosis terapéutica , debemos continuar operando en el más alto nivel , como lo hemos hecho en el logro de la contratación para la Fase 3 de nuestro principal candidato hacia nuestros pacientes" .

La meta de pacientes de reclutamiento de Spark para el estudio de fase 3 fue de un mínimo de 24 pacientes. El estudio abierto, aleatorizado y controlado se basa en un estudio de fase 1/2 de ensayo clínico en el que 12 pacientes ciegos relacionados con RPE65 demostraron mejorías notables en la visión funcional , pasando en algunos casos, de ser profundamente ciegos a ser capaces de reconocer las caras y deambular de forma independiente. Todos los pacientes en edad escolar incluidos en el ensayo eran capaces de cambiar de las aulas de Braille a las aulas de personas videntes.

Además de la contratación de fase 3, Marrazzo compartió varios cambios corporativos en la conferencia de JP Morgan , entre ellas:

La compañía estábien posicionada para ser el primero en obtener la aprobación de la FDA de EE.UU. para una terapia génica y se prepara para lanzar el primero de una serie de terapias para tratar las importantes necesidades no satisfechas de los pacientes con distrofias hereditarias de retina .

Spark espera presentar un nuevo fármaco en investigación ( IND) para una segunda distrofia retiniana hereditaria este año.

  La compañía presentó resultados alentadores en su Fase 1/2 de la hemofilia B, programa en el que un participante en el estudio se mantiene sano seis meses después de la infusión de vectores .

Dos nuevos miembros del equipo se han unido a Spark : Carol Greve - Philips, vicepresidente senior de negocios y Joseph La Barge , vicepresidente senior de administración de empresas y consejero general. Greve - Philips anteriormente se desempeñó como vicepresidente de desarrollo corporativo de Genzyme ; La Barge jugó un papel fundamental como consejero general en Tengion , Inc. , el desarrollo de estrategias de propiedad intelectual para las terapias basados ​​en células .

 La compañía desea inscribir su ensayo de fase 1/2 para la hemofilia B y está avanzando hacia la clínica con programas de terapia génica para tratar múltiples enfermedades neurodegenerativas fatales .

Para obtener más información sobre Spark Therapeutics visite www.sparktx.com o sigue su Twitter @spark_tx .

 

Traducción: Rodrigo Lanzón.

 

Entrevista sobre las células iPS, los estudios clínicos y más a Masayo Takahashi

Masayo Takahashi

En la siguiente noticia publicamos la entrevista realizada a la doctora Masayo Takahashi, quien lidera un equipo que lleva a cabo primera vez un estudio clínico en humanos basado en células iPS.El trabajo comenzó con el reclutamiento de pacientes en el 01 de agosto 2013 en Japón.

1.¿Puedes contarnos un poco acerca de sus antecedentes?A modo de MD / Ph.D.y oftalmólogo qué ve también a los pacientes, y además hace la investigación?¿Cómo fue que se interesó en las células madre?Son sus intereses principalmente en las células iPS?

Sí, tengo las consultas externas en dos hospitales próximos a RIKEN y veo a los pacientes con degeneración de la retina.

Me encontré con el concepto de células madre en el laboratorio del Prof. Gage del Instituto Salk en 1995.En ese momento decidí hacer el tratamiento de las enfermedades degenerativas de la retina con células madre.Así que presenté el concepto de células madre para el trasplante de retina, por primera vez en 1998 (Mol. Cell. Neurociencia 1998)

Después de varios años de investigación en Japón me trasladé a las células madre embrionarias porque me di cuenta de que las células madre somáticas no pueden expandirse lo suficiente para muchos pacientes como un tratamiento estándar.Con la ayuda del Dr. Sasai hicimos la retina con las células epiteliales del pigmento de las células madre embrionarias (PNAS 2002).Cuando vi las acumulaciones de pigmentación de las células en el plato, el doctor Sasai me pidió que lo evaluara en el año 2000, yo estaba segura de que sería el primer tratamiento de RPE de celulas derivada de ES y se utilizaría de manera exitosa y fuera industrializado.Yo reporté el primer tratamiento de un modelo animal usando células madre embrionarias de primates (Invest. Ophtalmol. Vis. Ciencia. 2004)

Pero dudé en desarrollar un tratamiento con células madre embrionarias porque yo misma como un oftalmóloga no quería usar inmunosupresor para los pacientes mayores con enfermedades de los ojos.Así que era natural que inmediatamente me trasladase a las células iPS en 2005, cuando me enteré de las células iPS por el artículo que salió.

 

2.Como líder del primer estudio pionero en humanos de una terapia basada en células iPS, puede decir que el proceso que fue hacer la prueba sea una realidad que comienza con el reclutamiento de pacientes en el 01 de agosto?¿Cómo tuvo que prepararse para el estudio?¿Qué pasos ha tenido que dar?¿Cree que algunos de sus datos pre-clínicos pueden ser publicados pronto?

Como se informó en el Invest.Ophthalmol.Vis.Sci. 2004, tuvimos la prueba de concepto con RPE derivadas de ES y listo para entrar en la preparación para el ensayo clínico.Así que empezamos estudio preclínico con células iPS humanas desde 2007.Luego nos confirmó que las hiPS-RPE tienen las características adecuadas para el uso clínico en el aspecto de la calidad, la cantidad, consistencia y seguridad.Estos datos fueron finalmente aceptados en el Informe de células madre.

 

3.¿Puede decirnos cuántos pacientes se han inscrito hasta el momento?¿Están ya están realizando las células iPS autólogas de los pacientes inscritos? Para el paciente ¿cuánto tiempo cree usted que tardará a partir de su inscripción para que reciba su tratamiento?

No podemos anunciar la inscripción debido a la confidencialidad de los pacientes.

La cirugía se llevará a cabo 10 a 12 meses después de la inscripción.

 

4.¿Qué método está siendo utilizado o se utilizarán para hacer las células iPS?Virus Sendai, por ejemplo, u otro enfoque?¿Por qué eligió este método?

Hemos decidido utilizar un plásmido (vector episomal) de acuerdo con la discusión con Cira

 

5.¿Cómo va a validar las nuevas células iPS de cada paciente?¿Va a, por ejemplo, hacer toda una serie de pruebas, como la genómica, la expresión génica, epigenética, la diferenciación in vitro y el comportamiento in vivo en modelos animales?Hacer este tipo de pruebas de validación de los desafíos del presente, pueden ser costosos y llevar mucho tiempo?¿Por qué son importantes?

Elegiremos líneas iPS adecuados a través de la genómica, de la morfología, de los marcadores de células madre y cariotipo.Cira nos ayudará.Tenemos una buena técnica para la diferenciación de células RPE del 100% de las líneas de células iPS que elegimos hasta ahora.

Hicimos la prueba de eficacia in vivo en la investigación preclínica, pero no vamos a hacerlo de nuevo en la investigación clínica.Por otra parte, vamos a hacer la prueba de la tumorigenicidad de iPS-RPE de cada paciente al menos durante los primeros pacientes iPS-RPE.

Es mucho tiempo y dinero lo que consume.Sin embargo, es importante evaluar a fondo, ya que será el primer estudio.

 

6.Sería muy útil si usted podría explicarnos la diferencia entre un estudio clínico y un ensayo clínico?Entiendo que usted está comenzando con un estudio clínico.¿Cómo funciona eso, y suponiendo que todo vaya bien con este estudio, cuál sería el siguiente paso?Un ensayo clínico?

Un estudio clínico es bajo la ley del profesional médico.Se trata de un sistema único en Japón que es como la exención de un practicante.

El ensayo clínico es el sistema habitual en el mundo bajo la ley farmacéutica.La ley farmacéutica se ha cambiado para hacer la medicina regenerativa más amigable, por lo que en la próxima aplicación clínica vamos a utilizar la pista "ensayo clínico".

Nuestro primer autotrasplante de hojas iPS-RPE pueden convertirse en «terapia avanzada" (es también el sistema único en Japón).Yo no creo que vaya a ir bajo ensayo clínico ya que es demasiado caro para ser un tratamiento estándar comercializado.

7.Muchos pacientes me han preguntado cuántos años puede ser que tome antes de que tengamos las terapias basadas en células iPS para la degeneración macular si son totalmente aprobadas y de uso común.¿Qué opina al respecto?

Depende de la regulación en cada país.Sin embargo, no se convertirá en un uso común antes de los 10 años.(En Japón será de 5 años más o menos.)

8.En el largo plazo, ¿cree que los pacientes pueden ser tratados a través de enfoques celulares iPS totalmente de forma autóloga o es importante establecer bancos de células iPS para la coincidencia potencial y uso alogénico? 

Para realizar el tratamiento como una norma, el costo debe ser disminuido.En ese sentido, será necesario el trasplante alogénico.También debemos pensar en cómo bajar el coste de un trasplante autólogo.

 

9.Advanced Cell Technology está llevando a cabo el mismo tipo de enfoque clínico pero usando células madre.¿Puedes comentar sobre eso y cómo su estudio y el de ellos son similares o diferentes?

Vamos a tratar la degeneración macular relacionada con la edad de tipo húmeda con hojas de RPE, mientras que ACT están tratando la degeneración macular relacionada a la edad del tipo seco con suspensión celular.

 

10.¿Qué te excita más sobre las células madre y cómo ves el campo en general en 5-10 años?

Con células madre embrionarias o iPS, la medicina regenerativa va a entrar en la etapa industrializada por lo menos en el campo de la RPE.

El efecto de la medicina regenerativa no dependerá de las células del donante, pero dependerá de la condición de acogida y la habilidad de la cirugía.Debemos pensar en ello como tratamientos médicos.Por otra parte, las terapias de medicina regenerativa, especialmente de retina, se completará con la rehabilitación (atención baja visión), por lo que deben pensar en el sistema médico total.

En cuanto a las células madre, el potencial de la evaluación de células de la retina derivadas de iPS de pacientes es emocionante.Nunca hemos evaluado las células de la retina de los pacientes.

 

Vocalía de Comunicación en RetiMur.

Traducción: Rodrigo Lanzón.